Notes

+21.yy başlarında biyofizikçiler iki metodun bulunmasını
sağlamışlardır(Xışını kristallografisi ve NMR).Her iki araç biyolojik makromoleküllerin üç boyutlu yapılarının yüksek çözünürlükte belirlenmesinde anahtar rol oynamaktadır.

YAPI-İŞLEV HİPOTEZİ
+Yapı-işlev hipotezi moleküler biyolojinin temelidir.
+Kütle spektrofotometresi makromoleküler kütleleri şaşırtıcı derecede bir doğruluk ile belirliyebilmektedir.
+Optik sptektreskopi ile hızlı kinetiklerin işaretlenmesi femtosaniye çözünürlük sayesinde yapılabilmektedir
+Floresan işaretçiler ile birlikte kombine edilmiş ışık mikroskobu ile hücre içerisindeki tek bir molekülün yeri saptanabilmektedir.
+Kütle taram mikroskobu ile makromolekül yüzeyinin profilleri ve zamana bağlı değişimleri belirlenebilmektedir.
+Elektron mikroskobu ile atomik çözünürlükte görüntüler elde edebilmekte ve tek bir molekül ile hücresel çalışmalar arasındaki boşluğu doldurmaktadır.
+Nötron spectroskopisi hücre içerisindeki proteinlerin fonksiyonel dinamikleri hakkında bilgi vermektedir.
+Sinkotron radyasyon dairesel dikroizimi ile polipeptid omurgasındaki elektronik geçişler incelenebilmektedir.

SEDMİNTASYON VE SANTRİFÜJ
Santrifüj kuvveti kütle,hız ve yarıçap değişkenlerine bağlıdır.

Santrifüj Tipleri
1.Çıkabilecekleri max sedimentasyon hızına
2.Vakumlu/Vakumsuz olmalarına
3.Sıcaklık kontrollü/kontrolsüz olmalarına
4.Santrifüj tüp kapasitesi ve hacmine bağlı olarak değişmektedir.

Diferansiyel Santrifüj : biyolojik bileşenlerin büyüklük şekil ve yoğunluklarından faydalanarak çökme hızlarına bağlı yürütülen santrifüj

Yoğunluk Gradiyenti Santrifüjü: İki farklı tipi bulunmaktadır.
-Yoğunluk Gradiyenti Hız Santrifüjü:Örnek tüpte yukarıdan aşağıya doğru doğrusal bir şekilde artan bir dizilim
oluşturmak için sükroz ya da gliserin gibi maddeler kullanılır.(benzer yoğunluğa sahip mol. bakılır)
-Yoğunluk Gradiyenti Denge Santrifüjü:Yüksek yoğunluğa sahip gradiyentler oluşturmak için CsCl2 ve CsSO4 gibi tuzlar kullanılır.

Kromotografi:Çeşitli maddelerin hareketli faz yardımıyla sabit bir faz arasından değişik hızlarla hareket etmeleri
esasına dayanır.

Kolon Kromotografisi:Proteinlerin saflaştırılmasında sıklıkla kullanılır.

Jel Filtrasyon Kromotografisi: Proteinlerin molekül büyüklüğüne göre ayrılma esasına dayanır.büyük proteinler
küçük proteinlere göre kolondan daha önce çıkarlar.

İyon Değişim Kromotografisi:Proteinleri üzerinde taşıdıkları net yüke göre ayırır.

Affinite Kromotografisi:Enzim,hormon vb spesifik proteinlerin saflaştırılmasında kullanılır.

Yüksek Performans Sıvı Kromotografisi (HPLC) : HPLC uçucu olmayan kimyasal ve biyolojik bileşenlerin ayırımı
için kullanılır.

Spektroskopi:Elektormanyetik ışımanın ve bazı parçacıkların bir cisim tarafından saçılması,yansıtılması, soğurulması ve salınmasıdır.

Spektrofotometre:Genelde ışık şiddetini ölçebilen aletlerdir.

Jel Elektroforezi:Makromolekülleri büyüklük elektrik yükü ve diğer fiziksel özellikler temelinde ayıran bir yöntemdir.

Agaroz Jel Elektroforezi:DNA moleküllerinin ayırımı,tanımlanması ve saflaştırılmasında kullanılan standart bir yöntemdir.

SDS-PAGE:PAGE'in ayırma gücü makromoleküllerin moleküler ağırlıklarının tayininde hassasiyetle kullanılabilir.

Western Blot:Protein solüsyonunda aranan bir proteinin var olup olmadığını varsa ne kadar olduğunu anlamak için kullanılan bir yöntemdir.Antikor tespitinin özgünlüğü ile jel elektroforezinin rezolüsyonunu bir araya getiren bir yöntemdir.